Para
el cultivo de amiba se utilizan diversos medios que emplean antibióticos para
controlar el crecimiento bacteriano. El Imipenem, antibiótico batalactámico,
actúa sobre la mayoría de los gérmenes presentes como flora fecal. Se optimizó
el cultivo de Entamoeba histolytica/ dispar (EH/ED) utilizando Imipenem,
comprobar la vialidad de la amiba con este antibiótico y extraer el ADN
amibiano para tipificación. Se inocularon 22 tubos con el medio de Boeck y
Drbohlav con 1g de heces positivas para EH/ED, a 12 de ellos se agregó 200 µL
de Imipenem (25mg/mL) al inicio y 50 µL diarios y a los 10 restantes 150 µL de
una combinación de Penicilina, AmiKacina y Eritromicina (50 µL de cada uno). Se
verificó el crecimiento y viabilidad parasitaria mediante tinción con eosina al
1% y contaje en cámara de Neubwer a las 24, 48, 72 horas y 7mo día, con
resiembra y lecturas en iguales intervalos. Se extrajo el ADN mediante Kit
Wizar SV Genomic de PromegaÒy se amplificó con indicadores
genéricos. Se obtuvo una diferencia significativa entre el número de parásitos
vivos de los cultivos con Imipenem = 6,6x106, 11x106,
17x106 y 21x106 vs. la
combinación de Penicilina, Amikacina y Eritromicina = 1x106, 2,8x106,
3,3x106 y 3,3x106 a las 24, 48, 72 horas y 7° días
respectivamente (p< 0,05). Se realizó la extracción del ADN y se amplificó
con iniciadores genéricos obteniendo una banda de 1076pb. El uso de Imipenem
para el cultivo de EH/ED permite obtener un crecimiento óptimo, mantener la
viabilidad del mismo por tiempo prolongado, y la obtención de ADN amibiano de
óptima calidad para su uso en biología molecular, evitando el uso de
combinaciones de antibióticos.
UCLA - Biblioteca de Ciencias y Tecnologia Felix Morales Bueno
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